动物的游离细胞以及植物或微生物去壁后的原生质体,在电刺激下可进行细胞融合,且融合率高、无毒性、操作简便及融合后的细胞继续培养成活率高等特点,是细胞工程手段的又一进展。
细胞电融合仪操作:
(1)开启电源,关闭“输出开关”,将开关搬向正弦输出档,此时可根据实验需要,将正弦频率选择在1~1.3MHz,脉冲宽度为0.1ms或10Hs,脉冲幅度为150V,脉冲频率为1次/s,并依次按下各标定按键,调整正弦电压(即正弦幅度)旋扭,使电压表处于5-1OV;
(2)将电融合池内两电极距离调整成1~1.5min,并用毛细吸管吸取制备的原生质体悬液约0.1~0.2ml置融合池中,盖上盖片,注意在融合池中,特别是在两电极间不能容有气泡;
(3)将融合池置于显微镜载物台上,并将两电极的输出端与仪器的输出电缆接通,然后用低倍镜(10xl0)找出融合室两电极间的焦面,此时可观察到原生质体呈平均分布状态,互不接触;
(4)打开输出开关,原生质体在高频交流电场作用下,迅速按电极垂直方向排列,此时应控制正弦电压大小,如果原生质体接触缓慢,可适当提高正弦电压;如果原生质体间接触过快,应立即降低电压,否则相互接触的原生质体很快会连接成串珠状。